一份準確的核酸報告這樣誕生
檢驗人員為樣本編號並錄入資訊
在PCR儀上進行的擴增檢測，要歷時約一個半小時 徐程 攝
這兩天，經歷了第一批“網格化”篩查的市民發現，有些小區已經重新進入“決賽圈”，有些延長了管控時間。其中起到關鍵作用的，是一份份核酸報告。
對于市民來説，核酸檢測看似只有兩步：登記採樣，等待數小時後在健康雲App上查詢結果。事實上，這背後凝聚了基因擴增實驗室（PCR實驗室）檢驗人員的大量工作。
採樣後，標本經歷了怎樣的“奇幻漂流”之旅？記者近日走進同濟大學附屬東方醫院南院檢驗科PCR實驗室，聽吳文娟主任揭秘一份準確的核酸報告是如何誕生的。
標本轉運簽收
環節：清點密封消毒
“醫生，我今天在你們醫院做的核酸什麼時候有結果呀？還要多久呀？”
“醫生，我急需核酸報告，能加急幫我檢測一下嗎？”
這幾天，申城各醫療機構的醫務人員總會接到這樣的問詢電話。很多人想像，核酸採樣後，直接用機器檢測很快就能出結果了。但其實，自從採樣護士在你的鼻部或咽部“輕捻慢攏”後，還要經過標本簽收、核酸提取、核酸轉移、核酸擴增、結果審核等步驟。
核酸檢測樣本採集後，採集人員會清點數目，並用密封袋包裝好，用消毒劑噴灑消毒，然後放進標本轉運箱，由專人送到核酸檢測實驗室。檢測人員收到樣本後會先對轉運箱消毒，並在開啟後對轉運箱內壁和標本採集密封袋二次消毒，隨後拆開密封袋取出樣本。
“核酸的採集管上都有條碼資訊，簽收人員要理清標本來自哪一個社區或人群，是單採還是混採。”吳文娟表示，“另外，我們還會留意標本上的時間，便于日後需要時回溯。”
賦予“身份證”
要點：識空管防溢灑進負壓
之後，核酸標本就將經歷“奇幻漂流”的第二步——要有“身份證”啦！檢驗人員則將這一步稱為“標本前處理”。“PCR反應是在96孔板上實現的，每一個孔位都該有自己獨一無二的身份。”吳文娟説。
看似只是“前處理”，但防備之心可是一點兒也不能松。檢驗人員要識別空管或溢灑情況的發生。尤其在大人群10:1混採時，小小的試管被拭子擠滿，一旦陽性標本出現了溢灑，一方面可能造成其他標本結果的污染（假陽性），另一方面會對實驗室的生物安全産生威脅——這是PCR實驗室的檢驗人員同樣要穿成“大白”模樣的原因——醫用帽子、N95口罩、面屏、護目鏡、醫用防護服、隔離衣、一次性鞋套、兩層手套，有了這些“束縛”，才能給檢驗人員創造最安全的環境。
此外，PCR實驗室要求嚴格分區，最好是負壓實驗室。空氣流動只會從外向內，那麼實驗室裏的污染就不會擴散到外界，可以保證實驗室外面的安全。
PCR加樣
目標：“揪出”遺傳物質
拿到“身份證”的核酸標本並不能直接測試，而是要先提取核酸，對其進行擴增。因此，核酸標本“奇幻漂流”的下一站，是PCR加樣區——簡單來説，檢驗人員要把病毒的遺傳物質（核糖核酸）給“揪出來”。
檢驗人員戴著雙層手套，在生物安全櫃內一管一管地擰開螺旋蓋，手工吸取樣本，加入核酸提取板孔中，再擰上螺旋蓋將標本放回原處。
“有多少份樣本就有多少次的重復操作。”吳文娟説。那時，檢驗人員與新冠病毒“擦肩而過”的距離可能只隔著兩層乳膠手套——也就是2毫米，但核酸檢測工作不允許他們害怕。
獲得核酸後，檢驗人員用移液槍將核酸轉移至事先準備好反應液的反應管裏，制成反應體係，讓它進入“奇幻漂流”的下一站：擴增分析區。
“不能出錯，不能有遺漏，不能發生生物安全事故。可以説檢驗人員全身時刻處于高度緊張的狀態。就單説‘加樣’，檢驗人員要用極小的槍頭將每個提取好的核酸，大概是一滴水的四分之一加入到試劑中，每一步操作都必須十二分地謹慎。”吳文娟告訴記者，“我們迫切希望能有開蓋、加樣的儀器來‘解放’檢驗人員，可現有的儀器在速度上並不能令人滿意，遇上大樣本篩查只能靠手工操作。”
核酸擴增
關鍵：開弓沒有回頭箭
經歷了復雜費時的前期制備過程，樣本終于來到了“奇幻漂流”的關鍵一站。樣本的採樣品質如何、核酸提取的品質如何、結果如何都將在此處見分曉。
這裏不得不提一下曾斬獲諾貝爾獎的聚合酶鏈反應（PCR），這是上世紀80年代中期發展起來的一項體外核酸擴增技術，它可以將目標基因片段于數小時內擴增百萬倍至數億倍，成為當今生命科學研究最為重要且廣泛使用的技術手段之一。
怎麼理解擴增？如果把標本提取出來的核酸看作是一塊土地，新冠病毒是種子，如何知道土地裏有沒有種子？簡單的方法是，加點水和肥料（試劑），讓種子一個變兩個、兩個變四個、四個變八個……“病毒是看不到的，而且微量標本也不容易檢測到，所以要讓它變多，才方便檢測出來。”吳文娟解釋。
當反應管在機器上開始檢驗後，也就意味著“開弓沒有回頭箭”——從採樣到核酸制備，任何一個環節出現問題都可能導致返工重測，從而使報告時間加倍。
3月15日，國家衛健委發布《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）》。其中，《方案》將解除隔離管理和出院標準修改為“連續兩次新型冠狀病毒核酸檢測N基因和ORF基因CT值均點35（熒光定量PCR方法，界限值為40，採樣時間至少間隔24小時）”，這兒的“CT”是指擴增的閾值。“簡單來説，CT值越低，説明陽性越強；CT值越高，説明陽性越弱。”
作為初篩實驗室，只能向疾控中心報告“疑似陽性”。“我們會將CT值登記報告，上報相應區域的疾控部門。隨後根據疾控的要求轉運原管標本以供復核。”吳文娟説，PCR實驗室也會通過紫外線消毒。據介紹，通常陰性標本會儲存一兩天以備查驗。
結果審核
標準：確保無誤報結果
走到這，核酸標本的“奇幻漂流”之旅並沒有結束。檢測人員需要對擴增結果進行分析：包括同批隨樣本檢測的陰陽性質控結果是否在控、基線設置、逐孔分析內標及樣本結果是否正常等。當陰陽性質控全部符合檢測要求，排除假陰性、假陽性可能，對異常結果樣本及時進行復核，確保無誤後才能最終報告結果，並上傳到健康雲。
有人好奇，健康雲核酸結果查詢裏，“OFR1a/b陰性，N基因陰性”是什麼意思？吳文娟解釋，這是新型冠狀病毒核酸的兩個特異性片段，“一般同一份標本中兩個基因檢測結果均為陽性，會判斷為陽性，單基因陽性則需復檢。”
“現在我們檢驗科的工作包括了‘願檢盡檢’——市民需要核酸陰性報告這張‘通行證’的；‘應檢盡檢’——住院患者和陪護，還有醫院承擔的密接、次密接及高風險人群的核酸檢測。這幾天，還有‘網格化’篩查的任務。”吳文娟的語氣裏透露著疲憊。
儀器運作時，檢測人員也不能輕松一會兒，此時，新的一批標本又來了。吳文娟説，檢驗人員一直在超負荷運轉。“防護服是不透氣的，全身罩在裏面，剛穿上就會很熱。加之機器一刻不停，熱量積聚一天後整個實驗室會非常悶熱，即使開著空調，室內溫度也會達到28℃-30℃。此外，實驗室裏靜電也很強烈，因此也特別幹燥。”她説，“我們中的很多人已經連續幾天都沒有回過家了，大家都是‘5+2’‘白+黑’的節奏在工作，能夠躺下來休息一會，就覺得很滿足了。”
